间接免疫荧光法（基于BIOCHIP嵌合技术）与ELISA法诊断重症肌无力的比较分析发表时间：2023-04-17 12:51 编者按 我国重症肌无力指南推荐AChR抗体和MuSK抗体的检测方法为放射免疫法（RIA）和酶联免疫法（ELISA），两者均可提供精准的定量结果。近期市场上新推出了一些基于间接免疫荧光法（IIF）的检测技术和产品，与指南推荐的ELISA方法比较结果如何呢？ 现分享一篇发表在Diagnostics杂志的文章，该研究表明：无论是AChR抗体还是MuSk抗体，免疫荧光方法作为一种新的应用，与ELISA方法相比，尚无法满足临床对MG的诊断需求 重症肌无力(MG)是一种慢性自身免疫性疾病，其特征是自身抗体介导的神经肌肉传递障碍，导致骨骼肌无力和疲劳[1-3]。发病特点是眼部肌肉无力，导致复视和/或上睑下垂。约20%的患者仅表现为眼肌症状，通常称为眼肌型MG (OMG)，而大多数患者在几年内出现其他骨骼肌症状，进展为全身型MG (GMG)。发病特点为早发和晚发2个高峰，分别多见于40岁以下的女性和50岁左右的男性[4]。 自身抗体的检测对于MG的诊断、预后和对治疗反应监测至关重要[5]。位于神经肌肉接头处突触后膜上的乙酰胆碱受体(AChR)自身抗体对MG具有高度特异性，该抗体具有致病性，在大约85%的MG患者中可检测到[6]。在大约6%的MG患者中，自身免疫反应是靶向肌肉特异性酪氨酸激酶(MuSK)[7]。MuSK自身抗体也具有致病性，主要在年轻女性中检测到，并与疾病进展的严重程度相关[8]。 目前，市场上检测AChR和MuSK自身抗体的商业化方法，包括放射免疫沉淀法(RIPA)和酶联免疫吸附法(ELISA)[9-13]。最近，一种新的基于BIOCHIP嵌合技术的多参数间接免疫荧光(IIF)检测方法可同时检测抗AChR和MuSK自身抗体。本研究旨在比较BIOCHIP IIF法与常规ELISA检测方法检测AChR和MuSK自身抗体的性能。 材料与方法 1. 研究人群 本研究为观察性回顾性研究，纳入71例来自意大利巴勒莫大学附属医院神经内科的MG确诊患者，其中男性40例（31 - 83岁），女性31例（18 - 78岁）。MG的诊断是基于MG的国际共识指南[14]。 在所有MG患者中，10例(14%)患有胸腺瘤，9例(13%)使用胆碱酯酶抑制剂单药治疗，大多数(55%)另外使用口服糖皮质激素和/或用于激素减量的免疫抑制剂治疗(29%)。 2.检测方法 检测AChR自身抗体：商品化ELISA定量试剂盒（RSR Ltd., 英国)和BIOCHIP IIF方法(MG mosaics, Euroimmun,德国) 检测MuSK自身抗体：商品化ELISA定量试剂盒(IBL International GmbH, 德国)和BIOCHIP IIF方法(MG mosaics, Euroimmun, 德国)。 结果 1. AChR Ab检测结果比较 71例MG患者中，AChR抗体经ELISA法定量检测阳性率为44/71(62%)，经BIOCHIP IIF法定性检测阳性率为27/71(38%)。 表1列出了ELISA法和IIF法检测AChR抗体阳性的检出情况。两种方法检测AChR抗体的总体一致性为(26 + 26)/70 = 74%，kappa系数为0.51 (95% CI 0.32-0.71)。 表1 BIOCHIP IIF与ELISA检测抗AChR抗体的一致性  ELISA法检测AChR自身抗体的中位数(IQR)水平为1.25(0.25-12.88) nmol/L，其中13名受试者的抗体水平高于20 nmol/L (图1)。值得注意的是，17例ELISA法阳性的MG确诊患者中，BIOCHIP IIF仅能识别出2例抗体浓度呈中高水平的样本阳性（2/17，11.8%），其余15例低抗体水平的样本均无法被BIOCHIP IIF法识别。  图1 (a)AChR抗体直方图。大于20的结果在这里表示为20；(b)MuSK抗体直方图。 2. MuSK抗体检测结果比较 71例MG患者中，MuSK抗体经ELISA法定量检测阳性率为11/71(15%)，经BIOCHIP IIF法定性检测阳性率为2/71(4%)。 表2列出了ELISA法和IIF法检测MuSK抗体阳性的检出情况。两种方法对MuSK抗体检测结果的总体一致性为(58 + 1)/70 = 84%。kappa系数为0.11 (95% CI 0.00-0.36)。 表2 BIOCHIP IIF法与ELISA法检测抗MuSK抗体的一致性  讨论 MG的诊断需要临床特征和实验室诊断的多因素共同结合(图2)。AChR和MuSK自身抗体的灵敏和特异性检测已成为评估MG患者的必要实验室指标，因为血清阳性具有诊断、预后和治疗意义[15-19]。  图2 MG的诊断算法。血清学抗体检测是诊断MG的金标准。 MuSK抗体阳性患者预后较差，患者主要表现为延髓和呼吸肌受累，呼吸危象频发[3,20 - 22]。该类患者对胆碱酯酶抑制剂反应较差，常规的溴吡斯的明剂量经常引起副作用，而它们对糖皮质激素和许多类固醇保留剂的反应良好[23,24]。此外，对于初始免疫治疗反应不理想的患者，应考虑将利妥昔单抗作为早期治疗方案[25,26]。MuSK抗体主要属于IgG4亚类，它不涉及补体激活，而是直接抑制蛋白质功能[27,28]。MuSK抗体的浓度水平与症状严重程度和血浆置换反应的降低呈正相关[29]。 与MuSK抗体不同，AChR自身抗体主要属于IgG1和IgG3亚类，具有活跃的补体级联，导致突触后膜的破坏[30,31]。患者AChR自身抗体水平的时间变化可能与症状严重程度和对治疗的反应有关。因此，AChR和MuSK抗体分别与具有不同免疫病理机制的MG相关。 在过去的几十年里，已经开发了几种检测抗AChR和抗MuSK自身抗体的分析方法，如RIPA和ELISA[32-34]。本次评估的BIOCHIP IIF方法可同时检测AChR和MuSK自身抗体，虽然不能提供定量的血清自身抗体水平，但同时对所有相关抗体进行多参数分析可提供更快的结果和更具成本效益的方法。 本研究首次比较了新的多参数BIOCHIP IIF技术与ELISA在AChR和MuSK自身抗体评价方面的性能。结果显示，BIOCHIP IIF与ELISA法之间的整体一致性不佳。研究结果显示，用于MG诊断的BIOCHIP IIF法不能准确识别特定的自身抗体。尤其在ELISA中测得的低滴度自身抗体无法在BIOCHIP IIF中识别，从而患者被确认为“血清阴性”。综上所述，BIOCHIP需要进一步改进检测性能以满足临床对MG的诊断需求。 参考文献：Gambino C , Agnello L , Sasso B L , et al. Comparative Analysis of BIOCHIP Mosaic-Based Indirect Immunofluorescence with Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Diagnosing Myasthenia Gravis.[J]. Diagnostics (Basel, Switzerland), 2021, 11(11). |
