内分泌系统疾病相关抗体检测方法的推荐意见

（一）指标和方法学纳入标准

《意见》中涉及的抗体综合了专家委员会意见讨论，均为国内普遍使用、具有重要诊断价值的自身抗体以及卫生部临床检验中心室间质评涉及的自身抗体。参评方法学为国家药品监督管理局室间质评涉及的、国内已上市且广泛使用的以及临床文献中的常见方法学。

（二）参考文献证据级别评价标准

参考文献证据级别共5级：I级(最高证据)，使用盲法的大样本（≥200）随机对照方法学研究及方法学荟萃分析；II级，使用盲法的小样本（<200）随机对照方法学研究，或未使用盲法的随机对照方法学研究，或采用有效替代标志物的随机对照方法学研究；III级，应用相应方法的非随机对照研究，观察性（队列）研究，病例对照研究或横断面研究；IV级，专家委员会或相关权威的意见；V级，专家意见。

（三）专家评分标准及统计标准

专家认可度评分按Delphi评分进行打分，0分表示完全不赞同，10分表示完全赞同（0-2分反对，3-4分不推荐，5-6分酌情推荐，7-8分推荐，9-10分强烈推荐）。统计后评分平均值<7分或未收到半数以上专家评价的指标和对应方法学视为抗体检测方法学未形成共识予以排除。《意见》打分表发出48份，收回38份，有效38份。

自身抗体检测方法专家认可度评分和专家推荐

（内分泌系统疾病相关自身抗体）

《意见》中，对内分泌系统疾病相关自身抗体包括甲状腺疾病相关自身抗体、糖尿病相关自身抗体检测的推荐方法，见下表。

甲状腺疾病相关自身抗体：作用靶器官为甲状腺，是自身免疫性甲状腺疾病的重要诊断依据。

• 抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）：与抗甲状腺球蛋白抗体联合检测是诊断自身免疫性甲状腺炎的重要依据。建议采用化学发光免疫分析法（CLIA）或酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测。

  
  

• 抗甲状腺球蛋白抗体：主要用于疑似桥本甲状腺炎患者的诊断，常与TPOAb同时检测，也可作为产后甲状腺炎、无痛性Graves病等甲状腺疾病诊断的参考指标。建议检测方法是CLIA或ELISA。

  
  

• 抗促甲状腺激素受体抗体：是Graves病诊断标志，灵敏度约为90%，特异度可达99%，并且抗体水平还可作为预后和治疗的重要参考。建议采用CLIA、电化学发光免疫分析法（ECLIA）或ELISA检测。

糖尿病相关自身抗体：识别胰岛β细胞不同抗原成分，是评估胰岛β细胞是否存在免疫损害及疾病诊断分型的重要指标。

• 抗胰岛细胞抗体（ICA）：用于确诊1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）。ICA分析结果受不同的胰腺组织、标记方法、孵育时间、湿度以及不同生物学家的解释等因素影响波动较大，因此ICA是检测难度最大且方法学难以标准化的胰岛自身抗体。建议首选以灵长类胰腺冰冻组织切片为基质的间接免疫荧光法（IIFT）检测，也可采用ELISA检测。

  
  

• 抗酪氨酸磷酸酶（IA2）抗体：胰岛自身免疫活动的早期标志物，可作为T1DM、成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）的血清学诊断指标。抗IA2抗体的出现预示病情进展迅速，对T1DM诊断、预测及治疗监控有重要临床意义。建议采用CLIA、ELISA或放射免疫分析法（RIA）检测。

  
  

• 抗谷氨酸脱羧酶（GAD）抗体：出现早且持续时间长，是诊断T1DM和LADA最敏感的免疫指标，在年龄较大T1DM儿童患者和迟发型患者中多见，在神经系统自身免疫性疾病中也可起到辅助诊断的作用。GAD抗体水平在LADA患者中可反映病程及胰岛素分泌功能的衰退情况，高抗体水平的LADA患者应及早进行胰岛素治疗以保留残存β细胞功能。对T1DM、LADA拟诊患者建议采用ELISA或线性免疫印迹（LIA）检测。其中ELISA法检测抗谷氨酸脱羧酶抗体的优异性能拥有I级(最高证据)数据支持。

  
  

  抗GAD抗体也可见于僵人综合征患者体内，靶抗原GAD是γ-氨基丁酸（GABA）合成的关键限速酶，主要表达于脑灰质、胰岛β细胞等组织和细胞中。除对神经系统自身免疫性疾病有辅助诊断价值外，抗GAD抗体还是I型糖尿病的重要检测指标。由于僵人综合征患者和部分小脑共济失调患者的抗体水平显著高于糖尿病患者，故高水平的抗GAD抗体对僵人综合征等神经系统自身免疫性疾病的诊断有特殊意义。该抗体也见于部分患有边缘性脑炎的胸腺瘤、小细胞肺癌患者。对拟诊神经系统自身免疫病患者，建议采用以灵长类小脑为基质的IIFT筛查，使用ELISA或LIA确认靶抗原。

  
  

• 抗胰岛素抗体（IAA）是T1DM的免疫学指标之一，在2型糖尿病（T2DM）患者中阳性率较低，也见于部分甲状腺疾病。建议采用CLIA或ELISA检测，应注意现有检测方法不能区分疾病相关的IAA还是因注射外源性胰岛素而产生的IAA。

对于GAD抗体检测的来说，基于的设计原理不同，ELISA法试剂盒的性能会有差异。由佛罗里达大学牵头开展的国际多中心自身免疫糖尿病抗体检测标准化项目(ISAP)中，桥联ELISA法的检测性能最佳。双抗原夹心桥联ELISA法是传统酶标二抗间接ELISA法的升级，借助生物素-链霉亲和素等信号放大系统和专利抗原空间位点的充分暴露，大大提高了对GAD65抗体的检测灵敏度，使桥联ELISA法可作为传统放射免疫法的完美替代方案。

在另一项来自英国的队列研究中，RSR的桥联ELISA检测试剂盒也实现了GAD65抗体实验室检测方法的大幅升级：

该队列研究纳入了2006至2012年罗姆福德女王医院和皇家伦敦医院两家儿童糖尿病中心的316名儿童糖尿病患者，经至少两项自身抗体检测后296名(93.7%)儿童确诊为1型糖尿病。

在GAD抗体检测中，2011年12月前入组患者使用实验室自建检测法(ELISA和猴小脑切片间接免疫荧光），阳性率分别为18.4%和13.8%。2012年1月改用RSR 桥联ELISA法检测试剂盒后，抗体阳性率提升至66.7%。可见，RSR桥联 ELISA试剂盒的灵敏性远超实验室方法。

作为对2014 年版《自身抗体检测在自身免疫病中的临床应用专家建议》的全面修订，2020年版《推荐意见》涵盖了内分泌系统自身免疫疾病等多系统自身免疫疾病自身抗体的检测方法学推荐，可作为临床医师和检验人员选择自身抗体检测方法学的参考。以桥联ELISA为代表的RSR产品除服务于甲状腺自身免疫领域外，在自身免疫糖尿病领域已实现对传统放射免疫法和实验室非标准化方法的全面替代，可作为内分泌科特检实验室和检验科的高效选择。

参考文献：

1. 中国免疫学会临床免疫分会专家组. 自身免疫病诊断中抗体检测方法的推荐意见[J]. 中华检验医学杂志 2020年43卷9期, 878-888页, ISTIC PKU CSCD CA, 2020.

2. 黄干, 杨涛, 刘煜, 等.   中国胰岛自身抗体检测标准化计划报告：检测方法调查及准确性评估 [J] . 中华糖尿病杂志,2016,8 (12): 723-728.

3. Perchard R, MacDonald D, Say J, et al. Islet autoantibody status in a multi-ethnic UK clinic cohort of children presenting with diabetes. Arch Dis Child. 2015;100(4):348-352.